外泌体大规模提取的秘密都在这了

为什么要做大规模提取？

1）节省成本：Umibio大规模提取，同比试剂盒等方法提取节省人力成本，物力成本等50%以上，而且体积越大，成本优势越高；

2）提高效率：传统方法每个批次一般不会超过300ml，而大规模提取可以达数十升，一天内完成，以10L为例，时间可以压缩90%，甚至更多；

3）方便质控：每个批次通过连续进样，最终出来的成品，通过一次的提取，不用担心每个批次提取的差异过大，数据更稳定，有说服力；

4）纯度飞跃：通过大规模提取工艺，可以大量的去除杂质，优化后纯度远远比常规试剂盒提取高，更好的保留外泌体的活性和形态；

大规模提取是有参考的解决方案的，这两篇文献很好的做了阐释。

关键步骤[1]：

● 收集条件培养基（CM）：收集神经母细胞瘤 N2a 和成肌细胞 C2C12 的培养基，经过低速离心和 0.22 μm 过滤去除大颗粒和细胞碎片。

● 处理大体积培养基：对于大体积培养基（50 ml 至 200 mL），使用切向流过滤（TFF）系统进行浓缩和透析，然后加载到结合-洗脱分子筛层析（BE-SEC）柱上进行纯化。

● 分离 EVs：根据 280 nm 紫外吸收色谱图收集外泌体样品，浓缩后储存用于下游分析。

规模：

该方法能够从较大体积的培养基中纯化外泌体，通过使用不同滤膜（100 kDa 和 300 kDa）的 TFF 系统进行浓缩和透析，然后通过 BE L-SEC 柱净化，可保留大部分囊泡并提高纯度，适用于大规模外泌体纯化。

关键步骤[2]：

● 制备培养上清液：从小鼠脾细胞中获得小鼠 CTLs（CD8+T 细胞）和 T 辅助细胞（CD4+T 细胞），培养人 PBMCs、NK-92 细胞、Jurkat 6E-1 细胞和非贴壁 HEK293.2sus 细胞，收集培养上清液并过滤去除细胞和碎片。

● 超滤：使用 TFF 系统和 mPES MidiKros Filter Modules 对培养上清液进行超滤，浓缩并替换为 PBS。

● 阴离子交换柱色谱：将超滤浓缩的 EVs 加载到阴离子交换柱上，用 NaCl 线性梯度（0.15 M 至 0.8 M）或分步方法（0.3 M 和 0.5 M NaCl）洗脱，收集不同盐浓度下的洗脱组分。

规模：

通过该方法可从 4 L 培养上清液中制备外泌体，且能够有效分离生物活性外泌体和微泡样的外泌体，适用于大规模制备。

大规模提取有没有难度？

1）从基本操作上没有难度，每一步按部就班即可；

2）从经验和提取摸索角度，需要有大量的操作经验作为支持；

大规模提取全流程是什么样子的？

1）样本准备；

2）样本预处理；

3）连续进样浓缩；

4）提取纯化；

5）抽样检测质控；

6）无菌分装；

大规模提取外泌体产品应用：

1）肿瘤治疗：外泌体作为药物载体：科学家们正在设计工程化外泌体，通过工程化赋能，外泌体可以实现更高效、更安全的药物递送。

2）外泌体作为生物标志物：外泌体携带的内容物能够反映亲本细胞的生理病理特征，因此具有作为癌症早期诊断标志物的潜力。

3）免疫调节：外泌体在自身免疫性疾病中的应用：间充质干细胞外泌体（MSC-Exos）显示出强大的免疫调节和抗炎作用。

4）组织修复与再生：外泌体在组织修复中的作用：外泌体通过传递生长因子、细胞因子等活性物质，促进细胞增殖、分化和血管生成，从而在组织修复和再生中发挥重要作用。

5）工程化外泌体：为了提高外泌体的精准靶向递送和载药物能力，科学家们正在开发工程化外泌体。这些工程化外泌体通过基因编辑、表面修饰等手段，实现对外泌体功能和特性的精确调控。

Umibio目前有哪些服务与产品？

1）大规模提取服务：根据量的大小，执行梯度价格，帮您节省成本，快速获取外泌体；

2）人源外泌体：MSC，NK等细胞外泌体；

3）动物源外泌体：牛奶外泌体；

4）植物源外泌体：葡萄外泌体，姜黄外泌体；

参考文献：

[1] Corso G, Mäger I, Lee Y, Görgens A, Bultema J, Giebel B, Wood MJA, Nordin JZ, Andaloussi SE. Reproducible and scalable purification of extracellular vesicles using combined bind-elute and size exclusion chromatography. Sci Rep. 2017 Sep 14;7(1):11561.

[2] Seo N, Nakamura J, Kaneda T, Tateno H, Shimoda A, Ichiki T, Furukawa K, Hirabayashi J, Akiyoshi K, Shiku H. Distinguishing functional exosomes and other extracellular vesicles as a nucleic acid cargo by the anion-exchange method. J Extracell Vesicles.