植物外泌体提取方法参考

近期，植物来源的外泌体状纳米颗粒（Plant-derived exosome-like nanoparticles，PENs）逐渐成为研究领域的热点。小编在给客户提供服务的过程中也收到很多这方面的咨询，今天就将这些信息及如何收获PENs做下简单的整理，希望对大家有那么点点帮助。

一方面PENs是自然产生的，携带来自其母细胞的无害成分，并且其中一些已被证明具有治疗作用；另一方面，更多研究者们也聚焦其作为哺乳动物细胞来源外泌体（Mammalian cell-derived exosomes，MDEs)替代品，以规避MEDs技术的局限性，尤其是在靶向递送系统方面。

PENs的最大优势在于样本容易取得，适合于大规模生产。此外，PENs的生理、化学和生物学特性决定了其高稳定性，可以在体内的某些组织中积累并长期在外周血中循环，结合其低毒性、低免疫原性、高细胞摄取率的等优点，因此在疾病治疗以及作为纳米载体的应用开发中具有巨大的潜力。

PENs和MDEs之间有许多相似之处，但两者仍存在较多差异。MDEs的脂质双层主要由胆固醇、糖苷脂、神经酰胺和磷脂酰丝氨酸组成，它们具有稳定性和独特的刚度。相比之下，PENs的外泌体膜富含磷脂酸（PA）、磷脂酰胆碱（PC）、糖基二酰基甘油（DGDG）和单半乳糖基二酰基甘油（MGDG）,这些独特之处使其具有细胞调节活性，并可以在不同物种间的交流发挥更大作用^[1]。常规的PENs样本的制备结果同样需要经过透射电镜、NTA检测等质控项目，这也对其前处理及提取提出了较高要求。

对于葡萄、生姜、苹果等富含汁液的样本，我们可以通过以下方式进行前处理：

图片来源：Asian J Pharm Sci.DOI 10.3389/fpls.2022.1064412

1、取得新鲜样本后，根据样本不同采取多次清洗或去皮步骤。

2、利用高速搅拌器（匀浆器）将样本磨碎，过程避免温度过高。

3、将取得的果汁或液体经过1000g 10min、3000g 20min、10000g 60min多次离心，每次取上清，以去除杂质及大颗粒。

4、利用0.45um的过滤器过滤掉液体上清中的杂质，之后便可进行下一步的提取流程。

注：对于茶叶等汁水含量较低的样本，则需要在清洗后在一定体积中的冷PBS缓冲液当中行匀浆，之后再进行过滤操作。

作为外泌体提取的常见方法之一，沉淀法也十分适合PENs的提取。无论是单独使用沉淀法还是沉淀法和超离法组合使用都能满足较大规模PENs的提取要求。与其他方法相比，沉淀法在具有高得率的同时还可以最大程度保留PENs的活性并保持其形态，且由于其操作简单耗时短，非常适合PENs的规模化制备 ^[2]。

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如您也正在或准备开展PENs方面的研究，欢迎您致电4006-166-973交流技术问题或咨询相关产品。

引用文献：

[1] Plant-derived exosome-like nanoparticles and their therapeutic activities. Kim J, et al. Asian J Pharm Sci. 2022.

[2] Isolation of high-purity and high-stability exosomes from ginseng. Jinwoo J, et al. Front Plant Sci. 2023.