干货：如何获得更高纯度、更安全的MSC外泌体？

外泌体提取过程中，影响纯度的最大因素之一是杂蛋白，杂蛋白是令无数外泌体人为之头疼的痛点！

杂蛋白来源于哪里呢？

以MSC干细胞为例，在培养过程中的大量血清(FBS)、人血小板裂解物(HPL)、蛋白因子混合物的使用，这些都含大量外泌体杂质，其中一些杂质是蛋白因子，经过长期细胞培养也不会降解，增加了培养基的异源外泌体或者外泌体类似物，对于下游外泌体的制备带来诸多不可控的影响。

如何解决杂蛋白问题呢？

从实验设计的角度来说，在前端杂蛋白越少，意味着后端去除杂蛋白的方法和步骤越少，做过外泌体的朋友都知道，每减少一次纯化步骤，就能获取更多的外泌体，每增加一步，就会大幅度降低外泌体的得率。比如超离得率15%-20%、沉淀法得率35%-40%，等等。

因此，就迫切需要一款无血清、低蛋白的化学成分确定的培养基来满足MSC干细胞外泌体的上游细胞培养需要。

其他的培养体系到底有什么问题？

Fetal Bovine Serum（FBS）一直是细胞培养的霸主，客户一般选用的培养体系是：普通MSC细胞培养基+FBS，营养是比较足的，但是对于外泌体研究却面临如下问题：

1）胎牛血清里成分很多，生产工艺和产品质量难以控制；

2）胎牛血清里含量大量牛来源的囊泡，即使超离，也不可能100%去除，严重干扰外泌体纯化；

3）胎牛血清通常含有各种蛋白因子，种类繁多，形成聚体或颗粒，和外泌体大小接近，严重干扰外泌体纯化；

4）胎牛血清原材料批次有差异，批次一致性没有化学成分明确的培养基好；

5）病毒来源的风险和病毒检测成本极高；

所以，不管是科研客户还是工业客户，面对胎牛血清的时候都是在选择更加安全、化学成分更加简单、杂蛋白更少的的培养体系。

Human Platelet Lysate (HPL)一直以来是很多客户的重要选择，相对于FBS，成分没有那么复杂，选择普通MSC细胞培养基+HPL培养的工业化培养体系也不在少数，但是仍然面临不少问题：

1）血小板提取物等原材料缺少相应的质量标准，生产工艺和产品质量难以控制；

2）质量标准需要通过参数控制和验证，例如蛋白质、脂质、细胞因子含量和蛋白质组学分析等，但这些成分难以控制，也没有控制标准；

3）HPL含有各种蛋白因子，种类繁多，形成聚体或颗粒，和外泌体大小接近，严重干扰外泌体纯化；

4）原材料批次有差异，批次一致性没有化学成分明确的培养基好；

5）病毒来源的风险和病毒检测成本极高；

6）HPL来源有限，我国法律对血液制品提取物，包括HPL严格控制，无法实现产业化；

因此，HPL是一个选择，但是仍然不完善，还有很多空间，因此科学家还在努力，寻找更好的办法。

普通MSC细胞培养基+重组蛋白因子混合物是近年来不断优化的一个解决方案，已经无限接近化学成分完全明确了，但是还是有不少的缺点；

1）MSC细胞生长需要各种蛋白因子，种类较多，20种左右，这些蛋白和因子形成聚体或颗粒，和外泌体大小接近，严重干扰外泌体纯化；

2）部分蛋白和因子，即使经过长期细胞培养，也不会降解，严重干扰外泌体纯化；

3）部分蛋白和因子，都是试剂级，内毒素极易超标；

4）部分厂家，为了减少成本和降低技术难度，使用HPL再次提取物，提取各类蛋白或因子，这样带来HPL同样的问题和风险。

所以，重组蛋白因子混合物已经解决了大部分开发者的需求，如何更进一步，并且再少一些蛋白种类，并且国产化，就是大家期待的事情了。

Umibio通过潜心研究发现，其实只需要蛋白种类≤3种就可以实现外泌体的获取了！这款培养基有如下特征：