深度|外泌体裂解与未裂解的蛋白浓度差异比较报告

2019-11-26

各位做外泌体的小伙伴最近经常问我,你们做外泌体提取后的蛋白检测需要用到裂解液吗?是怎么裂解的呢?有没有什么技巧?怎么做才能让每次的实验结果重复性更好呢?这里小编就把我们研发部门的原始资料拿出来给大家分享一下,希望能够帮助到您。

实验目的:


通过BCA法检测血清外泌体裂解与未裂解的蛋白浓度差异。


材料和仪器:


1:Exosome(3个不同来源的血清制备的外泌体)

2:外泌体蛋白专用裂解液(Umibio, UR60101)

3:酶标仪

4:BCA检测试剂盒


样本说明:


Group 1A1-裂解后   B1-裂解前  (同一份外泌体,一分为二)

Group 2A2-裂解后   B2-裂解前  (同一份外泌体,一分为二)

Group 3A3-裂解后   B3-裂解前  (同一份外泌体,一分为二)


实验数据:


样品编号

A1(裂解后)

A2(裂解后)

A3(裂解后)

B1(未裂解)

B2(未裂解)

B3(未裂解)

OD值:

2.699

3.504

3.175

3.966

4.721

4.518

相对OD值:

2.613

3.418

3.089

3.880

4.635

4.432

计算浓度ng/uL

2267.28

2965.39

2680.07

3366.04

4020.79

3844.74

稀释倍数

20

20

20

10

10

10

原始浓度ng/uL

45345.53

59307.73

53601.44

33660.41

40207.90

38447.45


数据归一化处理:


数据处理

以未裂解作为对照组

Group 1

1.35

Group 2

1.48

Group 3

1.39

 

实验结果:


实验结论:


1:裂解后的血清外泌体蛋白浓度是裂解前的1.4倍左右;

2:为了获得准确的外泌体总蛋白量,建议裂解后再通过BCA法检测蛋白浓度。


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