做外泌体 Western Blot 鉴定吗?先来这看看 !

2018-03-20

1)外泌体Western blot鉴定时通常会检测哪些指标蛋白?                                             

    根据22篇外泌体相关文献的统计,排在前4位的检测指标为CD6313/22)、Tsg101(8/22) CD9CD81并列第三位(6/22);接着检测较多的4个指标为Alix4/22)、 HSP70(3/22) flotillin (3/22)Syntenin (2/22);此外还有一些指标仅在1篇文献中出现过,例如HSP90LAMP2BLMP1ADAM10nicastrinAChEAQP2RPL5a-1AT

    针对外泌体的定性检测至少选择两个指标就能满足文章发表需要了,比如检测CD63Tsg101

 

2, 外泌体Western blot鉴定时通常使用哪些公司的抗体?

    CD63 抗体的供应商:文献报道最多的两个公司Abcam (ab68418ab8219) Santa Cruz (sc-5275),其他公司有Systems Biosciences IncAbnova (clone MEM-259)BD Pharmingen (551458)

    Tsg101抗体的供应商:文献报道最多的两个公司Abcamab125011)和Santa Cruz sc-7964),其他公司有Thermo PierceSigma-Aldrich

    CD9抗体的供应商:文献报道最多的是Abcam (ab92726),其他的公司有Santa CruzSystems Biosciences Inc

    CD81抗体的供应商: 文献报道最多的是Santa Cruz (sc-9158H-121),其他的公司有Novus Biologicals (Cat# NB100–65805)ImmunoWay

    Alix抗体的供应商:文献报道的公司有Cell Signaling (#2171)Santa CruzAbcam

    HSP70抗体的供应商:文献报道的公司有Abcam (ab19136)Santa Cruz (sc-24)

    flotillin抗体的供应商: 文献报道的公司有BD Bioscience

Syntenin抗体的供应商:文献报道的公司有ThermoFisher Scientific (Cat# PA5-28826) Abcam (ab133267)

    其他抗体信息请查阅附录整理的文献资料。

 

3 外泌体Western blot定性检测中有没有阳性对照?

    从发表的文章来看,并没有一篇文章结果中提到了阳性对照样品,但是已经被文献报道的样品可以作为后人Western blot检测实验的阳性对照,通过这样阳性样品的检测来判断实验体系是否正常。罗列一下文献中的阳性对照样品:脂肪组织巨噬细胞外泌体、神经干细胞外泌体、大鼠皮层神经元外泌体、SCC-9Cal-27细胞外泌体、MDA-MB-231外泌体、星型胶质细胞外泌体、中性白细胞外泌体等。

 

 

4 外泌体Western blot定性检测中有没有内参?

     大部分文献中没有检测内参基因(19/22),个别文章中使用了ActinGAPDHTubulin作为内参进行检测(见下图),从检测的结果来看,外泌体中的ActinGAPDHTubulin的表达丰度相对于正常细胞样品中的较低,Western blot检测时可能会检测不到任何条带或者条带微弱。

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