外泌体实验 bug 多,靠这个方法我提前完成了课题!

 

做外泌体课题真的是让人欢喜让人忧,外泌体作为近几年的热点是个发高分的好方向,可实验操作起来也常常是虐人千百遍。就拿外泌体提取来说,使用超速离心法提取细胞上清里的外泌体,好不容易完成繁琐的步骤,最终却看不到任何沉淀。使用同样的方法提取尿液里的外泌体,倒是有不少沉淀,可是纯度又不达标。不同组织来源的外泌体,提取方法各异。净来回折腾,浪费样本了。

 

外泌体实验真是 bug 多,经历了这么多样本,头秃了,课题进度还是毫无进展!身经百战的大师兄一语点醒梦中人「提取外泌体是有技巧的,要根据样本的不同,选用不同的外泌体提取方法,方能达到事半功倍之效。」在师兄的指导下,我外泌体提取又快又好,课题进度大大提前,下面为大家附上好物分享与提取经验。先领福利,再上干货!

 

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选择符合样本特性的提取方法才能百战不殆,例如常见的超速离心法和聚合物沉淀法提取的外泌体中可能混有多种杂质,抗体亲和法和密度梯度离心法倒是能保证纯度,但是外泌体结构不完整。

 

下面总结了如何提取各种样本的外泌体,快快收藏!

 

1

尿液篇

 

为什么我的尿液样本会天差地别,BCA 浓度差了一百倍??

 

可能原因:健康样本,疾病样本,不同的疾病样本,其外泌体丰度差异很大,一定要多准备一些样本。

 

我的尿液样本提取的外泌体怎么老是有污染,冻存样本外泌体不太多。

 

可能原因:对于尿液样本来说,会有一定的污染概率,需要提前除菌操作,或者提取外泌体后过纯化 EPF 柱;另外,针对尿液将用于临床检测的需求而言,样本越新鲜提取,越接近实际情况,越有助于提高诊断准确性。

 

2

乳液篇

 

为什么我的乳液样本提取出来的蛋白浓度这么高?

 

可能原因:乳液如牛奶外泌体含有丰富的蛋白质,在样本预处理和后续提取过程中需要先去除杂蛋白和脂质;

 

乳液外泌体粒径比普通的 293T 细胞的外泌体大了好多,是啥原因?

 

可能原因:乳液中本身外泌体的粒径会偏大;

 

3

血液篇

 

为什么我的血液有时候提取不到外泌体?粒径也不对?

 

可能原因:溶血,会导致大部分外泌体破损,加上不同的提取方法外泌体提取效率 15%-40% 左右,又会损失很大一部分,基本上就很难看到外泌体了;也可能是样本冻存太久,外泌体降解了,有时候也是很难提取到外泌体的;

 

为什么我的血浆样本提取的外泌体沉淀非常的多,而且很粘稠重悬不了?

 

可能原因:血浆背景比较丰富,含有的杂蛋白比较多,从纯度的角度看,需要先去除杂蛋白,后续的实验才能进一步推进,不过这也会损失一部分得率;

 

4

细胞上清篇

 

为什么不同细胞外泌体分泌差异很大?同样的方法得到差一个数量级的结果!

 

可能原因:不同外泌体分泌外泌体用于信息交流的频率不同,分泌的外泌体量差异很大;

 

不加血清培养的细胞上清外泌体为啥这么少?

 

可能原因:没有添加血清的情况下,细胞生长所需营养不够,无法产生足够多的外泌体,甚至有的细胞在饥饿情况下会吞噬外泌体,建议用无外泌体血清或者外泌体专用无血清培养基;

 

我的外泌体提取浓度很低,无法解决后续实验需求的量和浓度怎么办?

 

可能原因:不同方法提取外泌体得率差异很大,确实有的方法为了提高纯度会损失很多得率,这个时候可以考虑在前期把上清液做一下浓缩,再优化外泌体浓度,用于后续实验;

 

5

组织篇

 

组织外泌体为啥我提取出来的都是杂质?

 

可能原因:组织外泌体提取最大问题是预处理的液化,用诸如胶原酶等,先液化,再过滤,再往后进行,方法差异很大,需要有高分文献支持,否则可能后续提取不到外泌体;

 

组织外泌体为啥有时候能提取到,有时候提取不到?

 

可能原因:组织外泌体分泌量根据来源不同,差别也是很大的,建议先找一些样本,做预实验,确保量足够再用于后续的规模化实验。

 

(上下滑动查看)

 

看来外泌体提取中的门道真是五花八门,细节决定成败,提取中某个步骤不够规范也会导致实验结果崩盘。只有充分了解不同样本的特性,做好实验前和实验中的准备加处理工作,方能提高实验效率。

 

现在,一起来重点观摩在尿液和乳液中提取纯化外泌体的示范视频吧!

 

 

 

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看了上面的视频,科研人的心里想必也跃跃欲试了,又快又好地提取加纯化外泌体是发表高分 SCI 的第一步,更多精彩视频可扫描上方二维码查看;我们还特意为大家申请了免费试用福利,助力正在探索外泌体的科研人们多多出结果!

 

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外泌体提取道阻且长,不同样本之间的差异也是很大的,样本的合理准备和选择,能解决 80% 的问题,搭配合适的提取方法,起到事半功倍的效果!

 

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