干货：宇玫博生物Umibio外泌体试剂盒的提取效率有多少？

实验背景：

由于原始样品中通常都是混合物，除了外泌体外还有大量的杂质、碎片等，无法直接计算出外泌体试剂盒的提取效率。

实验目的：

以高纯牛奶外泌体作为原始样品，通过宇玫博生物Umibio试剂盒获得外泌体提取效率。

实验材料：

1，  细胞上清外泌体提取试剂盒Umibio ，UR52121

2，  牛奶外泌体提取物Umibio，UR53201

样品预处理：

取3mL高纯牛奶外泌体，使用1×PBS稀释至60mL，平均分成20mL/管，准备进行外泌体提取。

提取外泌体：

1、稀释液预处理：在牛奶外泌体的PBS稀释液中加入Exosome Concentration Solution（ECS试剂），具体的加入剂量如下：

2、溶液混合：加入ECS试剂后将离心管盖紧，涡旋振荡器混匀1 min，再放置于4℃静置2 h；

3、沉淀外泌体：取出装有混合液的离心管于4℃以10000 g离心60 min，弃上清，沉淀中富含外泌体颗粒；

4、外泌体重悬：取1×PBS均匀吹打离心沉淀物和离心管壁四周（具体加入剂量如下表），待其溶解后，将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中；

5、收获外泌体颗粒：将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃以12000 g离心2 min，保留上清液，该上清液中富含外泌体颗粒。

纯化外泌体

1、纯化外泌体：将收获的外泌体颗粒粗品转入Exosome Purification Filter（EPF柱）上室中，于4℃以3000 g离心10 min，离心后收集EPF柱管底的液体，此液体即为纯化后的外泌体颗粒；

2、外泌体的保存：纯化后的外泌体以50-100 μL体积进行分装保存于-80℃低温冰箱中，以备后继实验使用。

外泌体的质检

1，通过BCA的方法检测外泌体总蛋白量，计算出提取效率。

2，通过透射电镜检测外泌体形态：

实验结论：

细胞上清外泌体提取试剂盒(Umibio ，UR52121)平均提取效率为35.9%。

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